Amarengo

Articles and news

Test Lecytynazowy-zasada, procedura, zastosowania i interpretacja

Fosfatydylocholina lub po prostu lecytyna jest substancją szeroko rozpowszechnioną w tkankach zwierzęcych, żółtku jaja i niektórych wyższych roślinach, składającą się z fosfolipidów połączonych z choliną. Niektóre mikroorganizmy posiadają lecytynazę, zwaną również fosfolipazą C, która jest enzymem, który rozdziela lecytynę fosfolipidową. Taka aktywność lecytynazy służy do scharakteryzowania kilku bakterii gram-dodatnich i gram-ujemnych.

cele

  • określenie zdolności mikroorganizmów do wytwarzania enzymu lecytynazy.
  • w celu identyfikacji bakterii na podstawie jej aktywności lecytynazy

zasada

Agar z żółtka jaja jest zróżnicowanym i wzbogaconym podłożem stosowanym w izolacji i przypuszczalnym różnicowaniu różnych gatunków na podstawie ich aktywności lecytynazy. Lecytyna jest normalnym składnikiem żółtka jaja. W agarze z żółtka jaja Składnik lipoproteinowy lecythovitellin może być podzielony przez lecytynazę na fosforylocholinę i nierozpuszczalny digliceryd, co powoduje tworzenie się osadu w pożywce. Mikroorganizmy posiadające enzym lecytynazę rozkładają lecytynę na nierozpuszczalny digliceryd i fosforylocholinę, co powoduje białą, nieprzezroczystą strefę wytrącania, która rozprzestrzenia się poza krawędź Kolonii. Taka nieprzezroczysta otoczka otaczająca kolonię, gdy jest hodowana na podłożu agarowym z żółtka jaja, wskazuje na dodatnią aktywność lecytynazy badanego organizmu.

Media: Agar żółtkowy

skład:

trawienie trzustki kazeiny 15,0 gm, witamina K 1 10,0 gm , chlorek sodu 5,0 gm, Papaic trawienie mączki sojowej 5,0 gm, ekstrakt drożdżowy 5,0 GM, L-cystyna 0,4 GM, Hemin 5,0 GM, Emulsja żółtkowa 100,0 ml, Agar 20,0 GM

końcowe Ph 7.0 +/- 0.3 w temperaturze 25ºC.

procedura

  • weź pętlę testowego organizmu i smugi go jako linię prostą na płytce.
  • inkubować beztlenowo w słoiku z gazem PAK natychmiast po smudze i przenieść do inkubatora utrzymywanego w temperaturze 35-37oC przez 24-48 godzin w przypadku beztlenowców, a w przypadku aerobów inkubować płytkę w temperaturze 35-37oC przez 24-48 godzin.
  • zbadaj płytkę pod kątem opalizującego halo otaczającego inokulum.

wyniki

  • pozytywny wynik testu:pojawienie się białej, nieprzezroczystej, rozproszonej strefy, która rozciąga się na podłoże otaczające kolonie.
  • Wynik negatywny: brak białej, nieprzezroczystej strefy rozciągającej się od krawędzi Kolonii.

Test Lecytynazy

zastosowanie

  • Lecytynazy bakteryjne są szczególnie interesujące ze względu na możliwą rolę tych enzymów w chorobotwórczości.
  • w identyfikacji Clostridium perfringens, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa lub Listeria monocytogenes .
  • aktywność lecytynazy S. aureus jest stosowana w wykrywaniu szczepów koagulazo-dodatnich, ze względu na wysoki związek między aktywnością lecytynazy a aktywnością koagulazy.

ograniczenia

  • zaleca się przeprowadzenie badań biochemicznych, immunologicznych, molekularnych lub spektrometrii masowej na koloniach z czystej kultury w celu pełnej identyfikacji.
  • utrzymanie stanu beztlenowego jest obowiązkowe.
  • ujemny test lecytynazy należy porównać z nieinokulowaną płytką kontrolną, ponieważ lecytynaza może rozproszyć się na całej płytce agarowej i utrudnić interpretację.
  1. Tille, P. M., & Bailey & Mikrobiologia diagnostyczna Scotta (Wydanie trzynaste.). St. Louis, Missouri: Elsevier.
  2. Cappuccino J. G. and Sherman N. 2008. Microbiology: a Laboratory Manual, 8th ed. Pearson Benjamin Cummings, San Francisco, CA, USA.
  3. https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/Content/hugo/EggYolkAgarModified.html
  4. www.vetbact.org/popup/popup.php?id=34&LANG = pl
  5. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC291196/?page=1
  6. vlab.amrita.edu/?sub=3 & brch=73 & sim = 974& cnt=1

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.