Amarengo

Articles and news

Lecithinase Test – princip, Procedure, anvendelser og fortolkning

phosphatidylcholin eller simpelthen, lecithin er et stof, der er bredt fordelt i dyrevæv, æggeblomme og nogle højere planter, der består af phospholipider bundet til cholin. Nogle mikroorganismer besidder lecithinase, også kaldet phospholipase C, som er et ferment, der opdeler phospholipid lecithin. En sådan lecithinaseaktivitet anvendes til at karakterisere flere gram-positive og gram-negative bakterier.

mål

  • for at bestemme mikroorganismernes evne til at producere lecithinasen.
  • at identificere bakterierne på basis af dets lecithinaseaktivitet

princip

æggeblomme Agar er et differentieret og beriget medium, der anvendes til isolering og formodet differentiering af forskellige arter baseret på deres lecithinaseaktivitet. Lecithin er en normal bestanddel af æggeblommen. I æggeblommeagar kan lipoproteinkomponenten lecithovitellin opdeles med lecithinase i phosphorylcholin og et uopløseligt diglycerid, hvilket resulterer i dannelsen af et bundfald i mediet. Mikroorganismer, der besidder lecithinase, nedbryder lecithin til uopløseligt diglycerid og phosphorylcholin, hvilket resulterer i en hvid uigennemsigtig udfældningsområde, der spreder sig ud over koloniens kant. En sådan uigennemsigtig halo, der omgiver kolonien, når den dyrkes på æggeblommeagarmediet, indikerer positiv lecithinaseaktivitet af testorganismen.

medier: Æggeblomme Agar

sammensætning:

pankreatisk fordøjelse af kasein 15,0 gm, vitamin K 1 10,0 gm, natriumchlorid 5,0 gm, Papaisk fordøjelse af sojabønnemel 5,0 gm, gærekstrakt 5,0 gm, L-cystin 0,4 gm, Hemin 5,0 gm, Æggeblommeemulsion 100,0 ml, Agar 20,0 gm

endelig pH 7.0 +/- 0.3 ved 25 kr.

Procedure

  • tag en loopful testorganisme og stræk den som en lige linje på pladen.
  • inkuber anaerobt i en gas pak-krukke umiddelbart efter striber og overfør til inkubatoren opretholdt ved 35-37oC i 24-48 timer for anaerober og for aerober inkuberer pladen ved 35-37oC i 24-48 timer.
  • Undersøg pladen for den opaliserende halo, der omgiver inokulumerne.

resultater

  • positiv test:udseende af et hvidt, uigennemsigtigt, diffust område, der strækker sig ind i mediet omkring kolonierne.
  • negativ test:fravær af et hvidt, uigennemsigtigt område, der strækker sig fra koloniens kant.

Lecithinase Test

anvendelser

  • bakterielle lecithinaser er af særlig interesse på grund af den mulige rolle af disse lecithinaser i patogenicitet.
  • til identifikation af Clostridium perfringens, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa eller Listeria monocytogenes .
  • lecithinaseaktiviteten af S. aureus anvendes til påvisning af koagulase-positive stammer på grund af høj forbindelse mellem lecithinaseaktivitet og koagulaseaktivitet.
  • kan bruges til at skelne mellem visse arter inden for slægten Bacillus.

begrænsninger

  • det anbefales, at biokemisk, immunologisk, molekylær eller massespektrometri-test udføres på kolonier fra ren kultur for fuldstændig identifikation.
  • vedligeholdelse af anaerob tilstand er obligatorisk.
  • en negativ lecithinase-test skal sammenlignes med en ikke-inokuleret kontrolplade, da lecithinase kan diffundere gennem hele agarpladen og gøre fortolkningen vanskelig.
  1. Tille, P. M., & Forbes, B. A. (2014). Bailey & Scotts diagnostiske mikrobiologi (trettende udgave.). St. Louis, Missouri: Elsevier.
  2. Cappuccino J. G. og Sherman N. 2008. Mikrobiologi: en Laboratoriemanual, 8. udgave. Pearson Benjamin Cummings, San Francisco, CA, USA.
  3. https://catalog.hardydiagnostics.com/cp_prod/Content/hugo/EggYolkAgarModified.html
  4. www.vetbact.org/popup/popup.php?id=34&LANG=da
  5. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC291196/?page=1
  6. vlab.amrita.edu/?sub=3&brch=73&sim=974&cnt=1

Skriv et svar

Din e-mailadresse vil ikke blive publiceret.